【產(chǎn)品名稱】：葛根提取物KUDZU ROOT P.E.

【中文別名】：葛根提取物

【英文名稱】：KUDZU ROOT Extract

【使用部位】：豆科植物柴葛[Pueraria lobata(Willd.)Ohwi]和甘葛藤(Pueraria thomsonii Benth.)的干燥根

【主要成分】：葛根素、葛根異黃酮

【化學成分】：其根中含多種黃酮類成分，主要活性成分為大豆素(daidzein)、大豆甙（daidzin）、葛根素（puerarin）、葛根素-7-木糖甙（puerarin-7-xyloside）等。葛根素是野葛的提取物，異名葛根黃素，分子式為C21H20O9，分子量為416.37，在甲醇—醋酸中為白色針狀晶體。

【原料來源】：日本產(chǎn)葛根主產(chǎn)于長野、岐阜縣。中國產(chǎn)于湖南、河南、廣東、廣西、浙江、四川、臺灣等省。韓國也產(chǎn)。多年生落葉藤本，長達10m，全株被黃褐色粗毛。塊根圓柱狀，肥厚，外皮灰黃色，內(nèi)部粉質(zhì)，纖維性很強。生于山坡草叢路旁及疏林中較陰濕的地方。秋、冬二季采挖，趁鮮切成厚片或小塊。

【存儲條件】：避光儲存于密封容器中

【原料采購標準】：

【產(chǎn)品規(guī)格】

葛根素10%（HPLC）葛根異黃酮40%（HPLC UV）

【含量測定】：

葛根素檢測方法：HPLC法（藥典）

色譜條件

色譜柱：C18(250×4.6)mm 5um

流動相：甲醇-水（25：75)

檢測波長：250nm

對照品溶液的制備取葛根素對照品適量，精密稱定，加30%乙醇制成每lml含80ug的溶液，即得。

供試品溶液的制備取本品粉末（過三號篩）約0.lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇50ml，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用30%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得。

【含量測定】：葛根素檢測方法：HPLC法

試劑和材料

甲醇：優(yōu)級純

無水乙醇：分析純

冰乙酸：優(yōu)級純

36%乙酸：用冰乙酸與水按9:16的比例配制。

葛根素標準品：純度≥95%

葛根素標準儲備溶液（2.00mg/mL）:準確稱取0.02g葛根素標準品（精確至0.0001g），用70%甲醇溶解并定容至10mL，混勻（此標準儲備溶液4℃冰箱中可保存7d)。

葛根素標準使用液（200ug/mL）：準確吸取1.00mL葛根素標準儲備溶于10mL容量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，混勻（此標準儲備溶液在4℃冰箱中可保存7d)。

D101大孔吸附樹脂：樹脂用70%乙醇浸泡24h，使其充分溶脹，反復用去離子水沖洗，將乙醇洗凈后裝入層析柱上，柱高10cm。

層析柱：長15cm，內(nèi)徑1.0cm。

2.儀器和設備

高效液相色譜儀：附紫外檢測器。

超聲波清洗器。

離心機：4000r/min

3.色譜條件

色譜柱：ODS C18(250×4.6)mm 5um

流動相：甲醇+36%乙酸+水=25+3+72

流速：0.6mL/min

檢測波長：247nm

進樣體積：10ul

4.試樣處理

單一葛根提取物制成的試樣：根據(jù)試樣含量，稱取0.50g-1.00g試樣（精確至0.001g），加適量70%甲醇，于超聲波清洗器中超聲提取20min冷卻至室溫，再用70%甲醇定容至10mL，混勻，靜置，上清液經(jīng)0.45um微孔濾膜過濾后，待液相色譜分析。多種植物提取物制成的試樣：根據(jù)試樣含量，準確稱取0.50g-1.00g試樣（精確至0.001g），加適量水溶解，并于超聲波清洗器中超聲20min，冷卻至室溫后用水定容至10mL，混勻，4000r/min離心5min。取1mL上清液上大孔吸附樹脂層析柱，用約40mL水以1mL/min淋洗雜質(zhì)，再用50mL70%甲醇洗脫葛根素，將洗脫液置于沸水浴蒸發(fā)近干，用70%甲醇將其溶解并定容至1mL，過0.45um濾膜后待高效液相色譜用。

5.標準曲線制備

分別吸取葛根素標準使用液，用70%甲醇稀釋并定容的濃度分別為5ug/mL、10ug/mL、20ug/mL、30ug/mL、40ug/mL、50ug/mL的標準系列。

6.色譜分析

在給定的儀器條件下進標準溶液系列和試樣凈化液進行液相色譜儀分析，以保留時間定性，以峰高或峰面積定量。

7.結(jié)果計算

試樣中葛根素的含量按下式進行計算：

X=

式中:

X-試樣中葛根素的含量，單位為克每千克（g/kg）；

c-由標準曲線求得進樣液中葛根素的濃度，單位為微克每毫升（ug/mL）；

V-試樣定容體積，單位為毫升（mL）；

m-試樣質(zhì)量，單位為克（g）。

計算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。

8 色譜圖

【含量測定】：葛根異黃酮檢測方法：HPLC法

1.色譜條件

色譜柱：C18(250×4.6)mm 5um

流動相：乙腈（流動相A）-0.02mol/L乙酸銨（pH=4.6）（流動相B），梯度洗脫，洗脫梯度程序見表下表

檢測波長：260nm

2、溶液的制備

2.1對照品混合溶液的制備取葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆甙元和染料木素對照品各適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml中含葛根素1mg、大豆苷0.2mg、染料木苷0.1mg、大豆甙元0.1mg和染料木素0.1mg的混合溶液，搖勻，即得對照品混合溶液。

2.2供試品溶液的制備取本品約60mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加60%乙醇適量，超聲處理30分鐘，放冷至室溫，加60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3、測定法

3.1標準曲線的制備分別精密量取對照品混合溶液0.05、0.1、0.5、2.0、5.0ml，置10ml量瓶中，加60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，得對照品系列溶液。分別精密吸取對照品系列溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以對照品溶液濃度（μg/ml）為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。

3.2測定精密吸取供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按標準曲線法以峰面積計算，即得。

【含量測定】：葛根異黃酮檢測方法：UV法

1.檢測儀器與試劑

儀器：北京譜析通用T6紫外-可見分光光度計

試劑：95﹪乙醇（分析純）

2.溶液制備

樣品溶液制備精密稱取樣品50mg，置50mL量瓶中，加95﹪乙醇適量，

超聲波震蕩30min，冷卻至室溫，用95﹪乙醇稀釋至刻度線，搖勻，過濾。

精密量取濾液0.5mL。置50mL容量瓶中，加入95％乙醇稀釋到刻度線，搖

勻即得。

3.樣品測定

打開儀器電源開關，預熱1h，待儀器自檢通過后，取樣品溶液在250nm處

以95％乙醇為空白溶液，測定吸收度。

4.結(jié)果計算

按葛根素吸收系數(shù)為680計算

含量（%）=（A×1000×50×50）/（W×680）×100%

式中A：供試品吸收度

W：供試品質(zhì)量（mg）。