【產品名稱】：黃芪提取物，ASTRAGALUS P.E.

【產品別名】：棉芪，黃耆，獨椹，蜀脂，百本，百藥棉，黃參，血參，人銜等

【英文名稱】：Total saponins of astragalus;ASTRAGALUS P.E.;Astragasli P.E;Astragalus Ext;Astragalos Extract;Astragalus Root P.E;Astragalus/Bay Chi Extract;AstraglusP.E

【使用部位】：黃芪Astralgus membranceus(Fisch)Bge Var.mongholicus(Bye)Hsiao干燥的根

【主要成分】：多糖

【原料來源】：膜莢黃芪主要分布于我國黑龍江、遼寧、內蒙古、河北、山東、山西、陜西、寧夏、甘肅、青海、新疆、四川以及云南等省區，蒙古、朝鮮、俄羅斯也有分布。商品黃芪卜奎芪主要分布于大興安嶺地區、嫩江、愛琿、孫吳等縣、內蒙古莫力達瓦旗，寧古芪主要分布于黑龍江省寧安、東寧、林口、穆棱、海林，正古芪主要分布于河北、張家口一帶。

蒙古黃芪主要分布于我國吉林、河北、山西和內蒙古等地，蒙古和俄羅斯也有分布。

我國黃芪野生資源已較少，膜莢黃芪和蒙古黃芪均被列入國家三級重點保護種類。目前藥材主要為栽培品種，主產于山西的渾源、繁峙、應縣、代縣、廣靈，內蒙古的固陽、武川、卓資，黑龍江和吉林等地。

【化學成分】：

黃酮類：蒙古黃芪根含槲皮素、山柰酚、異鼠李素、鼠李檸檬素、芒柄花黃素(Formononentin)、毛蕊異黃酮(Calycosin)、毛蕊異黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、毛蕊異黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷-6″-O-丙二酰酯、9，10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-O-葡萄糖苷、(6aR，11aR)-3-羥基-9，10-二甲氧基紫檀素、(6aR，11aR)-3-羥基-9，10-二甲氧基紫檀素-3-O-β-D-葡萄糖苷、(3R)-7，2-二羥基-3′，4′-二甲氧基異黃烷-7-O-β-D-葡萄糖苷、2′-羥基-3′，4′-二甲氧基異黃烷-7-O-β-D-葡萄糖苷、(3R)-7，2′-二羥基-3′，4′-二甲氧基異黃烷、(3R)-2′，3′-二羥基-7，4′二甲氧基異黃酮、(6aR，11aR)-10-羥基-3，9-二甲氧基紫烷、芒柄花素-7-O-β-D-葡萄糖苷-6″-O-丙二酰酯、紫檀素葡萄糖苷-6′-O-丙二酰酯、異黃烷葡萄糖苷-6′-O丙二酰酯。

2.皂苷類：膜莢黃芪中含有膜莢黃芪皂苷Ⅰ、Ⅱ(AstramembranninⅠ、Ⅱ)、黃芪皂苷Ⅰ～Ⅷ(AstragalosideⅠ～Ⅷ)、大豆皂苷(SoyasaponinⅠ)，其中膜莢黃芪皂苷Ⅰ和黃芪皂苷Ⅳ為同一化合物，即黃芪甲苷(AstrasieversianinⅫ)。蒙古黃芪中含黃芪苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ，以及胡蘿卜苷等。

3.多糖類：蒙古黃芪中含黃芪多糖Ⅰ-Ⅲ(AstragalanⅠ-Ⅲ，APS1，2，3)，萄聚糖AG-1、AG-2、雜多糖AH-1、AH-2等。

4.氨基酸類：以脯氨酸為主，還有γ-氨基丁酸、天冬酰胺、精氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、甘氨酸、絲氨酸等。

5.有機酸類：主要有阿魏酸、異阿魏酸、對羥基苯丙烯酸、咖啡酸、氯原酸、棕櫚酸、亞麻酸和亞油酸等。其他還有微量元素、核黃素、葉酸、維生素P、谷甾醇、羽扇豆醇、正十六醇等。

【薄層鑒別方法】：

方法一：取相當于5g藥材的提取物樣品，用100ml乙醇—水(57：43)混合液超聲提取10min，過濾，濾液在45℃的真空下濃縮，濃縮液用10ml乙酸乙酯與水的混合液(1：1)脫脂，棄去上層液，下層液用乙酸乙酯萃取2次，每次5ml，棄去乙酸乙酯層，水層用正丁醇萃取3次，每次5ml，合并正丁醇萃取液，再用水洗滌3次，每次2ml，在真空下揮去正丁醇，殘渣用1 ml甲醇溶解，即為供試品溶液。1mg黃芪苷Ⅳ用1ml甲醇溶解，即為對照品溶液。使用自動薄層點樣器，吸5μl待測液與對照液點于10×10cm硅膠60F254HPTLC板上，成8mm大小的斑點，兩點間距為6mm，基線距板底8mm。置10×10cm展開槽(先用5ml展開劑飽和10min)，以氯仿-甲醇-水(18：8：1)為展開劑，展開至距下板邊緣55mm，在冷空氣中放置5min使板自然干燥。在254nm、366nm下檢視；將板在硫酸試劑(將5ml硫酸加入到95ml冰凍的甲醇中)中浸漬1秒鐘，冷空氣中干燥，110℃加熱2min，在紫外366nm下檢測衍生板。

方法二：取黃芪藥材粉末3g或相當量的提取物，加甲醇20ml，加熱回流1小時，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100～200目，5g，內徑10～15mm)上，用40%甲醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水30ml使溶解，用水飽和的正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液；用水洗滌2次，每次20ml；棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述二種溶液各2μl，分另點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(13：7：2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，在日光下顯相同的棕褐色斑點；紫外燈(365nm)下顯相同的橙黃色熒光斑點。

【產品規格】：10%多糖10:1，20:1

【檢測方法】

黃芪多糖的檢測方法

保健食品中水溶性粗多糖的測定方法

1.范圍

本方法規定了保健食品中以葡聚糖為主要結構分子量在10000以上的水溶性粗多糖的測定方法。

本方法適用于保健食品中以葡聚糖為主要結構分子量在10000以上的水溶性粗多糖的測定。

本方法最低檢出濃度：5.0mg/L。

本方法線性范圍：5.0ug/mL—200ug/mL。

2.原理

食品中分子量>10000的高分子物質在80%乙醇溶液中沉淀，與水溶液中單和低聚糖分離，用堿性二價銅試劑選擇性的從其它高分子物質中沉淀具有葡聚糖結構的水溶性多糖，用苯酚-硫酸反應以碳水化合物形式比色測定其含量，其顏色強度與水溶性粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以葡萄糖為標準參照物并以此計算食品中水溶性粗多糖含量。

原理多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物。再以比色法測定。

3．試劑

本方法所用試劑除特殊注明外，均為分析純；所用水為去離子水或同等純度蒸餾水。

3.1 乙醇溶液(80%):20mL水中加入無水乙醇80mL，混勻。

3.2 氫氧化鈉溶液(100g/L):稱取100g氫氧化鈉，加水溶解并稀釋至1L，加入固體無水硫酸鈉至飽和，備用。

3.3 銅試劑儲備液:稱取3.0gCuSO4.5H2O，30.0g檸檬酸鈉，加水溶解并稀釋至1L，混勻備用。

3.4 銅試劑溶液：取銅儲備液50mL，加水50mL，混勻后加入固體無水硫酸鈉12.5g并使其溶解。臨用新配。

3.5 洗滌劑：取水50mL，加入10mL銅試劑溶液，10mL氫氧化鈉溶液，混勻，臨用新配。

3.6 硫酸溶液（10%）：取100mL濃硫酸加入到800mL左右水中，混勻，冷卻后稀釋至1L。

3.7 苯酚溶液（50g/L）：稱取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀釋至100mL，混勻。溶液置冰箱中可保存一月。

3.8 葡萄糖標準儲備溶液:精密稱在硫酸干燥器中干燥至恒重的葡萄糖標準0.5000g，加溶解，并定容至50mL，混勻，置冰箱中保存。此溶液每毫升含10.0mg葡萄糖。

3.9 葡萄糖標準使用液:吸取葡萄糖標準儲備液1.00mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混勻，置冰箱中保存。此溶液每毫升含葡萄糖0.10mg。

4．儀器

4.1 分光光度計

4.2 離心機

4.3 旋轉混勻器

5.分析步驟

5.1 標準曲線制備:

精密吸取葡萄糖標準使用液0.00，0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00 mL(相當于葡萄糖，0.010，0.020，0.040，0.060，0.080，0.10mg)分別置于25mL比色管中，準確補充水至2.0mL，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，在旋轉混勻器上混勻，小心加入濃硫酸10.0mL，于旋轉混勻器上小心混勻，置沸水浴中煮沸2min.，冷卻后用分光光度計在485nm波長處以試劑空白溶液為參比，1cm比色皿測定吸光度值。以葡萄糖濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線。

5.2 試樣處理

5.2.1 試樣提取:稱取混合均勻的固體試樣2.0g，置于100mL容量瓶中，加水80mL左右，于水浴上加熱2h，冷卻至室溫后補加水至刻度，混勻，過濾，棄去初濾液，收集余下濾液供沉淀多糖。

5.2.2 沉淀粗多糖:精密取5.2.1濾液5.0mL或液體試樣5.0mL，置于50mL離心管中，加入無水乙醇20mL，混勻5min.，以3000rpm離心5min.，棄去上清液。殘渣用80%乙醇溶液數毫升洗滌，離心后棄上清液，反復3—4次操作。殘渣用水溶解并定容至5.0mL，混勻，供沉淀葡聚糖。

5.2.3 沉淀葡聚糖:精密取5.2.2溶液2mL置于20mL離心管中，加入100g/L氫氧化鈉溶液2.0mL，銅試劑溶液2.0mL，沸水浴中煮沸2min.，冷卻后以3000rpm離心5min.，棄去上清液。殘渣用洗滌液數毫升洗滌，離心，棄去上清液，反復3次操作，殘渣用100mL/L硫酸溶液2.0 mL溶解并轉移至50mL容量中，加水稀釋至刻度，混勻。此溶液為試樣測定液。

5.3 試樣測定:精密吸取試樣測定液2.0 mL置于25 mL比色管中，加入50g/L苯酚溶液1.0 mL，在旋轉混勻器上混勻后，小心加入濃硫酸10.0mL后于旋轉混勻器上小心混勻，置沸水浴中煮沸2min.，冷卻至室溫，用分光光度計在485nm波長處，以試劑空白為參比，1cm比色皿測定吸光度值。從標準曲線上查出葡萄糖含量，計算試樣中水溶性粗多糖含量。同時作試樣空白實驗。

5．4 分析結果表述

試樣中水溶性粗多糖的含量按式（5.4.1）計算。

5．4．1 計算

式中:

x—試樣中水溶性粗多糖含量(以葡萄糖計)，mg/g;

m1---試樣測定液中葡萄糖的質量，mg;

m2---試樣空白液中葡萄糖質量，mg;

m---試樣質量，g;

V1---試樣提取液總體積，mL;

V2---沉淀粗多糖所用試樣提取液體積，mL;

V3---粗多糖溶液體積，mL;

V4---沉淀葡聚糖所用粗多糖溶液體積，mL;

V5--試樣測定液總體積，mL;

V6---測定用試樣測定溶液體積，mL。

5．4．2 結果表示

計算結果保留兩位有效數字。

6.技術參數

回收率：不同食品中不同濃度加標回收的回收率為87.8～110.8%。

精密度：同一試樣10次測定結果的RSD為5.8%。

干擾因素：測定過程中避免碳水化合物的玷污干擾。