同型半胱氨酸(HCY)（循環酶法/胱硫醚）

同型半胱氨酸（HCY）檢測方法 —— 循環酶法 / 胱硫醚法解析
一、循環酶法（Cycling Enzymatic Method）
1. 基本原理
循環酶法是目前臨床最常用的 HCY 檢測技術之一，其核心原理基于酶促循環反應，通過放大信號提高檢測靈敏度，具體步驟如下：
第一步：樣本中的 HCY 在3 - 磷酸腺苷 - 5 - 磷酰liu酸（PAPS）作用下，被蛋氨酸腺苷轉移酶（MAT）催化生成S - 腺苷同型半胱氨酸（SAH）。
第二步：SAH 在 SAH 水解酶（SAHH）作用下，可逆地分解為 HCY 和腺苷。
第三步：通過引入循環酶系統（如腺苷激酶、丙tong酸激酶等），將反應中生成的腺苷轉化為可檢測的信號物質（如 ATP、丙tong酸等），通過監測吸光度變化或熒光強度計算 HCY 濃度。
2. 技術特點
優勢 局限性
1. 靈敏度高（檢測下限可達 1 μmol/L）
2. 抗干擾能力強（可排除維生素 C、膽紅素等物質干擾）
3. 自動化程度高，適合批量檢測 1. 試劑成本較高
2. 需嚴格控制反應溫度（37℃）和時間
3. 樣本中若含較高濃度腺苷類似物可能干擾結果
3. 臨床應用
廣泛用于醫院檢驗科、體檢中心的常規 HCY 篩查。
適用于血清 / 血漿樣本，需空腹采血（避免餐后蛋氨酸升高影響結果）。
二、胱硫醚法
1. 基本原理
胱硫醚法基于 HCY 的轉硫化途徑，通過檢測 HCY 與絲氨酸在 胱硫醚 β 合成酶（CBS）催化下生成的胱硫醚 量來間接反映 HCY 水平，具體步驟：
在過量絲氨酸和維生素 B6（輔酶）存在下，HCY 與絲氨酸反應生成胱硫醚。
通過高效液相色譜（HPLC）或質譜（MS）定量檢測胱硫醚含量，結合反應速率計算 HCY 濃度。
2. 技術特點
優勢 局限性
1. 特異性高（直接反映轉硫化途徑活性）
2. 可同時檢測 HCY 代謝相關酶（如 CBS）功能異常 1. 操作復雜，需專業實驗室設備
2. 檢測周期長（通常需 2-4 小時）
3. 僅適用于科研或遺傳性疾病（如高胱氨酸尿癥）診斷
3. 臨床應用
主要用于遺傳性高同型半胱氨酸血癥的病因鑒別（如 CBS 缺乏導致的胱硫醚生成障礙）。
研究領域：探索 HCY 代謝異常與慢性病（如糖尿病、腎病）的關聯機制。
三、兩種方法的對比與選擇
指標 循環酶法 胱硫醚法
檢測目標 直接測定 HCY 濃度 間接測定 HCY 代謝產物胱硫醚
靈敏度 高（適用于低濃度樣本） 中等（需高濃度 HCY 才能檢測）
自動化程度 高（適配全自動生化分析儀） 低（需手動前處理和儀器分析）
臨床場景 常規篩查、療效監測 遺傳性疾病診斷、科研研究
樣本要求 血清 / 血漿（空腹） 血漿（需立即冰浴保存）
四、注意事項與質量控制
樣本采集與保存
循環酶法：采血后需盡快分離血清 / 血漿，4℃可保存 24 小時，-20℃可長期保存（避免反復凍融）。
胱硫醚法：血漿需用肝素鈉抗凝，避免使用 EDTA（可能螯合金屬離子影響酶活性），采集后 1 小時內離心處理。
干擾因素
循環酶法：避免溶血（紅細胞含腺苷酸激酶，可能干擾信號）、高脂血（需高速離心去除脂濁）。
胱硫醚法：需嚴格控制反應體系中維生素 B6 濃度（缺乏時 CBS 活性降低，導致結果偏低）。
結果解讀
循環酶法結果15 μmol/L，需結合臨床癥狀和其他檢查（如葉酸、維生素 B12 水平）判斷是否為高同型半胱氨酸血癥。
胱硫醚法若檢測到胱硫醚生成減少，需進一步基因檢測（如 CBS 基因突變）明確遺傳性病因。